原代细胞分离用常用的酶刀王整理

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2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-KD不等。它能消化多种组织 　　

3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。 　　

4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。

胰蛋白酶应用广泛，特异性也差，一般用在间质少的细胞组织；中性蛋白酶作用相对特异性，常用于皮肤组织细胞的分离，比胰蛋白酶也要温和点。以皮肤为例，胰蛋白酶既破坏桥粒也破坏半桥粒，其作用部位是基底层细胞和其上的棘层细胞，而中性蛋白酶只破坏半桥粒，不影响表皮细胞之间的连接，作用部位在基底膜Iv型胶原和纤维粘连蛋白。

鉴于胰蛋白酶和胶原酶的生物学活性和在不同浓度下消化各种组织小块所需的时间(小时)有差异，以及两者价格不等，有人采用胶原酶与胰蛋白酶并用，同时还可加透明质酸酶(对细胞表面糖基有作用)，采用两者的联合消化作用，对分散大鼠和兔肝、癌组织非常有效。

胰蛋白酶和胶原酶生物活性的差别

项目

胰蛋白酶

胶原酶

消化特性

适用于消化软组织

适用于消化纤维多的组织

用量

0.01%~0.5%

0.1~0.3mg/mL（u/mL）

消化时间

0.5~2小时（小块）

1~12小时

pH

8~9

6.5~7.0

作用强度

强烈

缓和

细胞影响

时间过长有影响

无大影响

血清、钙、镁离子

有影响

无影响

胰蛋白酶和胶原酶在不同温度下消化各种组织小块时所需时间(小时)(0.5~1cm3)

酶种类

较硬组织

软组织

4℃室温37℃

4℃室温37℃

胰蛋白酶（0.25%）

24~48

1~6

1~2

12~24

1~2

0.5~1

胶原酶（u/mL）

24

6

6.5

12

3

0.25

两者联合（对冲）

12~46

12~24

4~12

12~24

6~12

1~2

除上述两种最常用的消化酶外，还有链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶，近年来，还有一种从灰霉菌中提取的Pronase新酶分散细胞更佳。各位有特别的介绍可以来信告诉刀王和粉丝，让大家一起学习进步吧。

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