通过双适体激活的邻近诱导液滴数字PCR追

肿瘤来源的外泌体蛋白已经成为诊断癌症的有前途的生物标志物之一，但大量正常细胞来源外泌体的存在严重阻碍了其定量准确性。厦门大学化学生物学系杨超勇教授和宋彦龄副教授课题组开发了双目标特异性适体识别激活外体膜上的原位连接系统，结合液滴数字PCR（ddPCR）（TRACER）来精确定量肿瘤来源的外泌体PD-L1（Exo-PD-L1）。利用适体的高结合亲和力，双重适体识别的特异性和ddPCR的高灵敏度，该方法能够以免洗的方式追踪肿瘤来源的Exo-PD-L1，并且具有显着的灵敏度和选择性。由于具有极高的灵敏度，TRACER通过检测样本的Exo-PD-L1可以有效地区分癌症患者与健康供体，并且首次被鉴定为比总Exo-PD-L1更可靠的肿瘤诊断方法。总体而言，TRACER策略在分析外泌体的不同亚型，将外泌体转化为可靠的临床指标以及探索外泌体的生物学功能方面具有巨大的潜力。

图1.A外泌体的表征和两个高亲和力探针的验证。（A）两个高亲和力探针的连接部分的示意图。（B和C）通过透射电子显微镜（B）和纳米粒子跟踪分析（C）表征A外泌体。（D）MJ5C-L和SYL3C-L与A外泌体结合的流式细胞仪分析。

图2.PD对PD-L1和EpCAM双阳性A外泌体和PD-L1单阳性U外泌体的验证。（A）扩增的PLA连接产物的凝胶电泳分析。（B）A外泌体的ddPCR结果。（C）针对U外泌体的MJ5C-L和SYL3C-L探针的流式细胞术分析。（D）U外泌体的ddPCR结果。

图3.MJ5C-L和SYL3C-L对来自癌症患者的外泌体（A）和来自健康供体的外泌体（B）的流式细胞仪分析。（C）来自癌症患者和健康供体的不同浓度外泌体的ddPCR结果的热图。热图和比例尺的强度表示拷贝数的归一化值。（D）基于适体的免疫-ddPCR的流动格，用于通过超速离心的洗涤步骤对Exo-PD-L1进行定量。（E）癌症患者和健康供体的基于适体的免疫-ddPCR的定量结果。

图4.（A）癌症患者（n=33）和健康供体（n=12）之间通过ddPCR检测到的循环Exo-PD-L1的比较。（B）（A）的相应ROC曲线。

DOI:10./anie.

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