讲座纪要高级别B细胞淋巴瘤FISH判

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11月21日，年淋巴组织增生性病变病理新进展会议圆满落幕，专家们的讲座精彩纷呈，涵盖了淋巴瘤诊断的各个方面，高峰时段在线听课人数高达八千多人。在卫星会环节，安必平基因诊断事业部总监陈绍宇博士就日常工作中高级别B细胞淋巴瘤FISH探针使用时碰到的使用陷阱及不典型信号判读做了分享。

FISH与淋巴瘤诊断

荧光原位杂交技术（FISH）是利用荧光素标记的核酸探针，与组织中的目标靶序列进行杂交，从而反映基因或染色体的状态信息。FISH技术具有独特的形态与分子相结合特点，可检测绝大部分与肿瘤诊疗相关的基因或染色体大片段异常（扩增、缺失、断裂与融合），在肿瘤病理诊断中简单实用。

淋巴瘤病理亚型众多、诊断及鉴别诊断非常复杂，需要综合临床表现、病理形态学、免疫表型及分子遗传学来判断。其中，分子检测是淋巴瘤病理诊断思路中很重要的一环，为淋巴瘤患者的诊断及鉴别诊断、分子分型、治疗及预后判断提供了重要的辅助手段。而高级别B细胞淋巴瘤组织学分级高、分子分型对临床决策影响重大，指南推荐多种FISH靶点检测。陈博士从以下方面进行了分享：

探针的阈值

淋巴瘤相关探针大多都为断裂（易位）探针。断裂探针的阳性信号标准一般来讲红绿信号间距1-2个信号点直径及以上即可判断为阳性信号，但这并不是唯一且绝对的标准，实际上要综合多方面的因素：

内部因素：探针设计的红绿区段的长度和间距，以及探针所在区段的基因组特异性（如IGH基因在基因组中有非特异同源片段；

外部因素：镜下整体阅片的感觉（细胞核大小、信号强度、信号是否拉丝），样本经处理后的染色质松散程度以及采图摄像头的放大倍数。

这里需牢记一点：阳性细胞大多不是零散出现，而是成片出现。当大量正常信号间距背景细胞中，出现个别间距较大的细胞，更应理解为为此细胞的染色质比较松散而导致间距偏大（如下图）。

严格来说，阈值需要实验室自行建立，常用方法为20例同类型阴性样本，阳性信号的平均值+3倍标准差。若无法自建阈值，断裂探针可采用通用阈值10%-15%。注意这是基于一些前提条件：（1）不同断裂探针的设计（如红绿间距、长短）比较接近，大多为几百kb；（2）不同断裂探针的信号强度也比较接近，受样本处理的影响较小。当然，碰到临近阈值时，需结合样本信息（如大体/穿刺样本、选择的肿瘤细胞计数区域）及扩大计数来判断。

以MYC断裂探针为例，MDAderson专门进行了分析，可见除1R1G1F之外的比例更高的多种其他信号，其中1F/3F/4F为高频多见，nRnGnF少见。在伴有多种不同细胞克隆的样本中，信号类型表现也更为复杂，比如弥漫大B的信号复杂度就明显高于伯基特淋巴瘤。并且，FISH探针信号反映的是其基因所在区段或染色体的异常，信号类型越复杂，则其核型越复杂，并且与预后差相关。

MYC断裂探针使用陷阱

我国从年开始，CSCO指南就明确指出，对初发和治疗后复发的DLBCL均推荐FISH方法检测MYC、BCL2、BCL6重排，且明确定义了“双打击”及“三打击”淋巴瘤。

其中，MYC断裂探针使用最为广泛及重要。日常工作中，需要考虑到伯基特淋巴瘤和弥漫大B的遗传学差异。在伯基特淋巴瘤中，MYC断裂位点主要有三种类型，位于红色或绿色探针处则会表现为一红一绿一黄典型阳性之外的其他不典型阳性信号。MYC探针断裂位点的复杂性在不同肿瘤中可表现不同，如在DLBCL中较为多样，而在BL中则为单一；在DLBCL中更容易表现为复杂阳性信号，反映出不同起源细胞克隆的复杂程度，并且与预后相关。

实际工作中，MYC断裂探针及MYC-IGH融合探针，二者该如何选择？这里需注意两方面：

（1）断裂与融合探针的覆盖范围，同一探针不同厂家的位置及颜色设计差异。如BL中有三种断裂点，DLBCL中的断裂跨度主要为kb。融合探针中MYC的覆盖范围小于MYC断裂探针的。

（2）MYC-IGH融合在双打击淋巴瘤中预后最差，一篇大宗数据多例弥漫大B数据显示，双打击或双表达伴MYC-IGH融合占比5%，预后最差，故该融合探针可作为MYC断裂阳性后进一步做预后判断的指标。且在免疫母细胞型DLBCL和浆母细胞淋巴瘤中的MYC-IGH阳性率高，这两种肿瘤的组织学分级及预后也相对较差。

关于MYC基因具体的应用详解，还可参考我司之前